Установлено явление коррекции FAS - зависимого апоптоза у онкологических больных, обусловленное внутривенным введением озонированного физиологического раствора заключающееся 6 нормализации изначально увеличенного сывороточного уровня растворимого CD95 антигена и относительного содержания CD95- положительных мононуклеарных клеток периферической крови и в повышении эффективности противоопухолевой терапии

Нами обследовано 300 больных раком молочной железы в возрасте 35- 65 лет с гистологически подтвержденным диагнозом. В соответствии с «Гистологической классификацией опухолей молочной железы» ВОЗ (1981) y всех пациенток новообразование характеризовалось инфильтрирующим характером роста. Ha основанин клинико- инструментального обследования больных у 15 человек (5,0%) установлена І стадия, у 64 (21,4%) ІІ стадия, у 139 (46,3%) - III стадия, у 82 больных (27,3%) IV стадия процесса. Оперативное вмешательство в объеме мастэктомии, выполнено 265 женщинам (88,3%).

Контрольную группу составили 30 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту с обследованными больными (таблица 1).

Таблица 1 - Клиническая характеристика больных раком молочной железы с учетом стадии заболевания

Методика введения озонированного физиологического раство (ОФР) на фоне полихимиотерапии (ПХТ) разработана авторами (патент на изобретение «Способ лечения местнораспространенного рака молочной железы в предоперационный период (варианты)» №2207862 от 28.01.02.

Иммунофенотипирование мононуклеарных клетох периферической крови проводили с помощью моноклональных антител серии ИКО в реакции непрямой иммунофлуоресценции.

Сывороточное содержание растворимого CD95 антигена определяли в динамике разработанными авторами иммуноферментными методами с помощью моноклональных антител серии ИКО и меченых пероксидазой поликлональных козьих антител против мононуклеарных клеток периферической крови человека.

Использование ОФР на фоне комплексного и комбинированного лечения явилось одним из компонентов системы индивидуально- интегративной восстановительной терапии больных раком молочной железы. Пациентки были разделены на 6 групп:

1 группа - 48 женщин, страдающих местнораспространенным (МР) или метастатическим (МТ) РМЖ, получавших адъювантные или лечебные курсы ПХТ в сочетании с озонированным физиологическим раствором;

2 груша 54 больные МР и МТ РМЖ, получавших только адъювантные и лечебные курсы ПХТ;

3 группа 15 больных МР и МТ РМЖ, получавших адъювантные и дечебные курсы ПХТ и неозонированный физиологический раствор;

4 групна 16 женщин, страдающих МР РМЖ, получавших неоадъювантную ПХТ и озонированный физиологический раствор;

5 группа 15 больных МР РМЖ, получавших только неоадьювантную ΠΧΤ;

6 группа - 10 больных МР РМЖ, получавших неоадъювантную ПХТ и неозонированный физиологический раствор;

Концентрация озона в озоно-кислородной смеси подбиралась индивидуалько на основании предварительно полученных анализов гемограммы, иммунного статуса, оценке показателей антиоксидантной системы защиты и перекисного окисления липидов.

У впервые поступивших в стационар больных раком молочной железы независимо от стадии заболевания средний сывороточный уровень растворимого CD95 антигена достоверно превышает норму в 3,4 раза и соответствует величине, равной 1129,9±131,9 U/ml при норме 336, 9 plus/minus 16 ,2 U/ml. Сывороточный уровень растворимого CD95 антигена статистически достоверно превышает контрольный уровень на 1 стадии и затем сохраняется повышенным от стадии к стадии, составляя на IV стадии величину, превышающую норму в 2,0 раза (рис. 1).

Рис. 1. Сывороточное содержание растворимого CD95 антигена у больных раком молочной железы в зависимости от стадии заболевания

Сывороточная концентрация CD95 антигена изменялась в процесс проведения противоопухолевого лечения. По окончании 6 курсов ПХТ больных с последующей стойкой ремиссией заболевания наблюдалос снижение уровня растворимой формы CD95 антигена, приближавшееся содержанию этого белка у здоровых лиц. Содержание SCD95 антигена оставалось значительно выше показателей контрольной группы в случаях раннего появления рецидивов и метастазов.

Применение ОФР совместно с ПХТ, проводимой с лечебной или адъювантной целью, у больных, страдающих раком молочной железы, сопровождалось тенденцией к нормализации после курса лечения среднего сывороточного уровня SCD95 антигена. У пациенток, получавших только адьювантные и лечебные курсы ПХТ (2 группы), имела место тенденция к повышению концентрации 3-CD95 антигена (табл. 2). Такой же характер в изменении содержания растворимого белка прослеживался в сыворотке крови больных 3 группы, получавших адъювантные и лечебные курсы ПХТ и неозонированный физиологический раствор, причем уровень SCD95 антигена во 2 и 3 группах после курса лечения был достоверно выше, чем в первой. Более выраженные изменения сывороточного уровня SCD95 антигена были выявлены у больных местнораспространенным раком молочной железы. Применение озонотерапии совместно с неоадъювантной ПХТ приводило у больных, относящихся к 4 группе, к статистически достоверному снижению в 2,3 раза изначально повышенного сывороточного уровня 5CD95 антигена.
различия достоверны при сравнении показателей между группами: p<0,05;

Таблица 2 Сывороточное содержание растворимой формы CD95 антигена у больных раком молочной железы до начала и после окончания терапии

A различия достоверны при сравнении показателей до и после лечения: р<0,05;

- различия достоверны по сравнению с нормой: р<0,05;
** - различия достоверны по сравнению с нормой: р<0,0005.

У пациенток с местнораспространенным раком молочной железы, получавших только неоадъювантную ПХТ, среднее сывороточное содержание CD95 антигена имело тенденцию к повышению.

Таким образом, в обеих группах больных, получавших озонотерапию совместно с полихимиотерапией, наблюдалось снижение среднего сывороточного уровня $CD95 антигена. У больных, для лечения которых озонотерапия не применялась (2, 3, 5 и 6 группа), усредненный сывороточный уровень растворимого CD95 антигена не менялся и даж имел тенденцию к увеличению. Уменьшение избыточного, относитель показателей здоровых лиц, содержания SCD95 антигена можа рассматривать в качестве положительного эффекта ОФР. Известно, ч растворимый CD95 антиген способен ингибировать Fas-зависимь апоптоз иммунокомпетентных клеток [3]. Одновременно, повышенна концентрация SCD95 антигена является одним из факторо обеспечивающих уход опухолевых клеток от иммунного надзора путе блокады цитотоксического действия FasL-положительных Т-лимфоцитов Коррекция повышенной концентрации SCD95 антигена обеспечивает таким образом, нормализацию подавленных при формировании опухоли иммунных реакций, создавая условия для более полноценной реализация механизмов противоопухолевого иммунитета, потенцируцитотоксическое действие химиопрепаратов и обеспечивая болев эффективную терапию онкологических больных.

Подтверждением высказанного механизма действия ОФР могут служить следующие факты:

1. Показатели выживаемости в группах больных, получавших ОФР, оказались достоверно выше, чем в группах пациенток, получавших только полихимиотерапию:

общая выживаемость составила в 1 группе 4, 55 plus/minus 0 ,35 года, во 2 группе -2, 75 plus/minus 0 ,52 года (p = 6) в 3 группе -2, 86 plus/minus 0 ,45 года (p = 6) ,

безрецидивная выживаемость составила в 1 группе 3, 36 plus/minus 0 ,45 года, во 2 группе -1, 42 plus/minus 0 ,83 года (p = 0, 4) в 3 группе -1, 96 plus/minus 0 ,59 года (p = 0, 4)

2. Количество больных, проживших более 3 -х лет с момента окончания исследования (исследование проводилось в 2000-2002 годах) в 1 группе (n = 48) составило 22 человека (46%), во 2 группе (n = 54) - 9 человек (17%), в 3 группе (n = 15) - 3 человек (20%). Различия между первой группой больных, получавших озонотерапию, и второй или третьей группами больных, не получавших озонотерапии, были статистически достоверны (р<0,02).

Проведен анализ трехлетней выживаемости больных в зависимости от стадии заболевания при которой осуществлялась терапия. Среди больных РМЖ ІII стадии (n=19), получавших ПХТ и озонотерапию, число лиц, проживших 3 года и более с момента окончания исследования, равнялось 10 (53%). Среди пациенток с IV стадией РМЖ (n=29), получавших ПХТ и озонотерапию, трехлетняя выживаемость составила 41 %. Во 2 группе пациенток, получавших только адъювантные и лечебные курсы ПХТ, трехлетняя выживаемость равнялась 20,8% у больных РМЖ III стадии (п-24) и 6% у больных РМЖ IV стадии (п-30). Различия между группами оказались статистически достоверны по количеству пациенток, выживших в течение трех лет (р<0,05). Учитывая, что исходно группы были сопоставимы по стадии заболевания, размеру первичного очага, возрасту, сопутствующей патологии, характеру проводимого лечения, можно сделать вывод, что причиной наблюдавшихся различий в трехлетней выживаемости больных явилось применение озонированного физиологического раствора.

У больных первой группы, проживших 3 года и более с момента окончания исследования, выявлены достоверные различия в содержании сывороточного уровня 5CD95 антигена до и после курса лечения с применением химиопрепаратов и озонированного физиологического раствора. Если до начала терапии среднее сывороточное содержание SCD95 антигена составляло 690,7±148,1 U/ml, το по окончании терапии его уровень понижался (р<0,05) в 2 раза по сравнению с исходным и после курса лечения достоверно не отличался от нормального. Подобным образом нормализовался уровень $CD95 антигена и у больных, проживших 3 года и более с момента окончания исследования, но не получавших озонотерапию. Однако в этом случае не было выявлено статистически достоверных различий между концентрациями SCD95 антигена до и после лечения.

Это свидетельсвидетельствует 0 более выраженной нормализации сывороточного содержания SCD95 антигена после совместного применения химиотерапии и озонотерапии. Заметим, что клинически эти различия были ассоциированы со статистически достоверно более высоким показателем трехлетней выживаемости больных.

Таким образом, применение озонированного физиологического раствора сопровождалось изменениями, свидетельствующими 0 коррекции механизмов инициации программированной гибели эффекторных клеток иммунной системы, приводящими к нормализации клеточного противоопухолевого иммунитета и способствовало более эффективной полихимиотерапии.

При оценке относительного содержания CD95-положительных мононуклеарных клеток крови выялено, что у больных раком молочной железы до начала терапии этот показатель был статистически достоверно повышен по сравнению с нормой в 1,3 раза (р<0,005). У больных 1 и 4 групп, получавших наряду со стандартной терапией озонированный физиологический раствор, отмечалась нормализация количества CD95- положительных мононуклеарных клеток. Стандартная полихимиотерапия, которую получали больные 2, 3, 5 и 6 групп, не сопровождалась статистически достоверными изменениями относительного содержания CD95-положительных клеток.

Исследовано влияние озонотералии на относительное содержание CD95-положительных клеток периферической крови больных раком молочной железы в зависимости от стадии опухолевого процесса. Поскольку основное количество больных, включенных в данное исследование, находились на III и IV стадии опухолевого процесса, стандартная полихимиотерапия, дополненная озонотерапией, у больных ІШ стадией рака молочной железы приводила к статистически достоверному снижению относительного содержания CD95-положительных клеток крови до уровня нормы. В отсутствии озонотерапии тестированный показатель обнаруживал только тенденцию к понижению и остался статистически достоверно выше нормы. Он также статистически достоверно отличался от значений, полученных для предыдущей группы пациенток, в лечение которых применялся озонированный физиологический раствор.

У получавших ПХТ и озонотерапию больных, проживших 3 года и более с момента окончания исследования, также были обнаружены достоверные различия в относительном содержании CD95-положительных мононуклеарных клеток крови до начала и после окончания курса лечения. Если до начала терапии содержание CD95-положительных мононуклеарных клеток составляло в периферической крови 34,6±2,5%, то после лечения оно статистически достоверно понижалось в 1,4 раза сравнению с исходным (р<0,05) и не отличалось от нормы. Подобным образом нормализовалось относительное количество CD95- положительных мононуклеарных клеток и у больных, проживших 3 года и более с момента окончания исследования, но не получавших озонотерапию.

Пациентки, получавшие ПХТ и озонотерапию, но прожившие не более трех лет, также характеризовались статистически достоверным снижением содержания CD95-положительных клеток в процессе лечения. Однако оно было менее выраженным в сравнении с больными, прожившими более трех лет, количество CD95-положительных клеток не достигало нормы. У пациенток, проживших менее трех лет и не получавших озонированного физиологического раствора, относительное содержание CD95- положительных мононуклеарных клеток не уменьшалось, а статистически достоверно возрастало B процессе терапии. Повышение было статистически значимо не только в сравнении с относительным содержанием этих клеток до терапии, но и относительно их уровня у больных, получавших ПХТ и ОФР, и проживших более трех лет.

Заметим, что среди пациенток, получавших ПХТ и озонотерапию, трехлетняя выживаемость была зарегистрирована у 54% наблюдавшихся женщин. В групше, принимавшей стандартную полихимиотерапию, этот срок прожили только 17% больных.

Таким образом, озоно озонотерапия, продолжительности наряду C жизни больных, вызывает увеличением уменьшение относительного содержания CD95-положительных мононуклеарных клеток периферической крови.

Известно, что экспрессия CD95 антигена на мембране клеток приводит к потенциальной готовности последних к реализации апоптоза и, в конечном счете, может вызвать снижение количества активированных иммунокомпетентных клеток. Кроме того, CD95 антиген относят к активационным антигенам. Он может появляться на мембране активированных Т-лимфоцитов и обеспечивать инициацию Fas-зависимого апоптоза. Уменьшение изначально повышенного количества клеток, положительных по CD95 антигену, приводит к нормализации относительного содержания лимфоцитов, потенциально подверженных Fas-опосредованному апоптозу. Озон оказывает, таким образом, модифицирующее действие на содержание потенциально способных к инициации апоптоза иммунокомпетентных клеток, создавая условия для сохранения популяции эффекторных клеток, необходимых для реализации противоопухолевого клеточного иммунитета.

Подтверждением вышеприведенного действия озонированного физиологического раствора на механизмы инициации апоптоза служит озонозависимый характер изменения содержания CD95-положительных клеток в крови больных, имевших и не имевших рецидивы на протяжении последующих трех лет жизни. Содержание CD95-положительных мононуклеарных клеток периферической крови у лиц, имевших трехлетнюю безрецидивную выживаемость, статистически достоверно снижалось после терапии с применением озона.

Таблица 2 - Влияние предварительной обработки лиственной сульфатной целлюлозы на растворение остаточного лигнина при озонировании с расходом 0.225% от массы абс. сух, целлюлозы

Автор книги "Озон и другие экологически чистые окислители: Наука и технологии" 30-й Всероссийский семинар.
В.В. Лунин, Самойлович, В.Г., С.Н. Ткаченко, И.С. Ткаченко

По вопросам и предложениям свяжитесь с нами любым удобным способом

Телефон: 8 (800) 775-28-45
E-mail: info@ozonbox.pro
Соцсети: Вконтакте | Rutube